王群光醫師的中道自然醫學

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【氫分子生物學】注射氫氣生理鹽水

 讀者可以根據我們專利中提供的資料制備氫氣飽和溶液,用於實驗和產品開發。附件一是我們專利《一種具有治療缺血再灌注損傷功能的含氫注射液》的相關資料。

最近日本有一家公司開發出一種制備氫氣生理鹽水的新技術,該技術可以在不打開包裝的情況下,將普通生理鹽水轉化成氫氣飽和生理鹽水。該技術的關鍵是利用氫 氣具有極強大的擴散能力,把普通的聚乙烯材料的袋裝生理鹽水在氫氣飽和溶液中浸泡48小時,利用氫氣的擴散能力,氫氣透過聚乙稀材料進入生理鹽水,日本學 者利用這種方法獲得氫氣飽和生理鹽水已經用於臨床試驗,初步結果證明這種方法是可行的,用這種氫氣飽和生理鹽水給患者靜脈注射,對腦幹缺血的治療效果優於 傳統的治療藥物依達拉奉,對系統性紅斑狼瘡具有顯著的治療效果。


附件一

一種具有治療缺血再灌注損傷功能的含氫注射液


技術領域

本發明涉及醫藥技術領域,是一種可用於治療缺血再灌注損傷的含氫注射液



背景技術

缺血是臨床疾病中最常見病因之一。缺血再灌注損傷是腦缺血等疾病重要的病理生理過程。缺血性疾病通常可在早期採用溶栓和抗自由基損傷等措拖來治療,但有可 能繼發缺血再灌注損傷。至今未見有關採用含氫注射液防治缺血再灌注損傷的相關報導。在醫藥技術領域,氫氣目前僅作為保健品使用,日本有報導稱用含有氫氣的 飲用水作為美容保健品。



發明內容

本發明所提供的一種含有氫氣的注射液,可用於防治腦梗死等缺血性疾病導致的組織損傷和器官功能障礙。

制備方法如下:

1.脫氣處理
生理鹽水、糖鹽水或碳酸氫鈉等軟包裝醫用注射液,常溫中放置於0.4~0.8個絕對大氣壓下的低壓艙內2~24小時,再在常溫、常壓下放置4~12小時,使超飽和部分的氣體充分析出,隨後抽除析出的氣體。
2.低溫預處理
將脫氣處理後的注射液軟包裝袋置於2~10℃充分冷卻,以便注入氫氣後增加對氫氣的溶解度。
3.注入純氫氣
從低溫處理後的注射液軟包裝抽取總體積5%~15%的注射液,注入純氫氣使軟包裝袋充盈。
4.加壓助溶
將注入氫氣後的注射液軟包裝袋放入加壓艙1~5℃下持續加壓12~24小時,6個絕對大氣壓,使氫氣充分溶入注射液,減壓後取出置0~5℃保存備用,穩定24小時後即可使用。

本發明注射液經動物實驗證明:對大鼠腦缺血再灌注損傷模型能明顯減少腦梗死體積、減輕腦組織損傷、減少神經組織細胞凋亡數量、降低海馬和大腦皮質中 凋亡酶的活性,因此可用於治療腦缺血再灌注損傷。另外,在心肌缺血再灌注、腎臟缺血再灌注和肝臟缺血再灌注的損傷模型中也觀察到了類似的效果。因此本發明 含氫注射液再用做治療缺血再灌注損傷的藥物。



附圖說明


圖1:大鼠腦缺血再灌注後梗死體積的比較圖
    A:正常對照組;B:生理鹽水組;C:含氫注射液治療組



圖2:大鼠腦缺血再灌注後尼氏染色
A:正常對照組,A1:皮質50X,A2:皮質400X,A3:海馬50X,A4:海馬400X
B:陰性對照組,B1:皮質50X,A2:皮質400X,A3:海馬50X,A4:海馬400X
C:低劑量組,C1:皮質50X,A2:皮質400X,A3:海馬50X,A4:海馬400X
D:中劑量組,D1:皮質50X,A2:皮質400X,A3:海馬50X,A4:海馬400X
E:高劑量組,E1:皮質50X,A2:皮質400X,A3:海馬50X,A4:海馬400X



圖3:大鼠腦缺血再灌注後細胞凋亡圖譜
A:正常對照組,A1:皮質50X,A2:皮質400X,A3:海馬50X,A4:海馬400X
B:陰性對照組,B1:皮質50X,A2:皮質400X,A3:海馬50X,A4:海馬400X
C:低劑量組,C1:皮質50X,A2:皮質400X,A3:海馬50X,A4:海馬400X
D:中劑量組,D1:皮質50X,A2:皮質400X,A3:海馬50X,A4:海馬400X
E:高劑量組,E1:皮質50X,A2:皮質400X,A3:海馬50X,A4:海馬400X



圖4:大鼠腦缺血再灌注后皮質和海馬凋亡酶活性檢測圖譜




具體實施方式


現結合附圖和實施例對本發明作詳細描述。實施例僅用作說明本發明,不能視為對本發明權利要求保護範圍的限制。

實施例1 制備含氫生理鹽水注射液
1.脫氣處理
生理鹽水注射液500 ml軟包裝袋置於低壓艙中,常溫下以0.4個絕對大氣壓減壓處理2小時,取出後常溫、常壓下放置4小時,將析出氣體用注射器抽除。
2.低溫預處理
常壓下將上述脫氣處理後的注射液軟包裝袋置於2℃環境下2個小時以充分冷卻。
3.注入純氫氣
從上述低溫處理後的軟包裝袋抽出50ml的生理鹽水,常壓下注入2℃的純氫氣50ml(上海基量標準氣體有限公司氫標准氣產品,下同)。
4.加壓助溶
將注入氫氣後的注射液軟包裝袋放入加壓艙,5℃下持續加壓12小時,6個絕對壓,使氫氣充分溶入注射液,減壓後取出常壓下置5℃保存24小時後即可使用。


實施例2 制備含氫葡萄糖鹽水注射液

注射液為葡萄鹽水注射液,加壓助溶後常壓下置4℃保存備用,其餘同實施例1。



實施例3 制備含氫生理鹽水注射液

脫氣處理時,注射液軟包裝袋置於低壓艙,在絕對壓0.5個大氣壓中減壓處理14小時,取出後常壓下放置5小時;低溫預處理時,將脫氣處理後的注射液軟包裝 袋置4℃冰箱冷卻56小時;加壓助溶時,將注入氫氣後的注射液軟包裝袋4℃下持續加壓6個絕對壓,15小時;取出後置4℃常壓保存備用,其餘同實施例1。

使用上海奇陽科技有限公司的氣相色譜儀器,經過檢測上述實施例制備的含氫注射液為1.6%~2.0%[體積分數為(1.6~2.0) ×109]。


動物實驗
實驗動物:SD雄性大鼠,體質量220~250g,購於第二軍醫大學實驗動物中心。

取大鼠65隻,雄性,隨機分成5組:正常對照組、陰性對照組,實施例1制備的注射液低、中、高劑量治療組,每組13隻。除正常對照組外,其餘各組大鼠先制 備成腦缺血再灌注損傷模型,再灌注後10分鐘,分別腹腔注射生理鹽水和本發明實施例1制備的注射液。本發明注射液按體質量低劑量組注射0.3ml/100 g,中劑量組注射0.6ml/100 g,高劑量組注射0.9ml/100 g,陰性對照組和正常對照組均注射生理鹽水0.6ml/100 g。



大鼠腦缺血再灌注損傷模型的制備:

參照Longa、Kuge等報導的方法(詳見:Kuge Y,Minematsu K,Yamaguchi T,etal. Nylon monofilament foy intraluminal middle cerebral artery occ lusion in rats[J].Stroke,1995,26:1655-58),採用頸外動脈插入線栓法造模。SD大鼠用笑氣/氧(70:30)加1%七氟烷麻醉,仰 臥固定,頸正中切口,鈍性分離暴露右側頸總動脈,頸外動脈與頸內動脈,結扎頸外動脈遠端,游離其主幹備用。尼龍線長40mm,直徑 0.20~0.23mm,一端約0.5cm長度上均塗布聚胺酯清漆,使其頭端成一光滑的錐形,頭端直徑小於0.25 mm,從右側頸外動脈入口,至右頸總動脈後,轉向右側內動脈入顱推進1.7~9mm,微遇阻力時停止,完成一側大腦中動脈的阻塞。再灌注時緩慢地輕拉線栓 使其頭端回到頸外動脈內,可實現大腦中動脈再灌注。本實驗採用的動物模型均為缺血90分鐘後再灌注。


上述各組大鼠在腹腔注射24小時後處死,分別取腦組織進行TTC、H-E、尼氏、細胞凋亡染色,並提取海馬和大腦皮質腦區測定凋亡酶的活性。實驗結果如下:

1.觀察對大鼠腦缺血再灌注後腦梗死體積的影響
取各組動物腦組織,進行TTC染色,TTC染色是檢測組織缺血梗死體積的經典方法,染色後缺血區顯示為白色,正常組織為紅色。結果見圖1,圖1中,A.正 常對照組;B.陰性對照組;C.本發明注射液中劑量治療組。圖1顯示,陰性對照組梗死範圍分布在缺血側大腦皮質、海馬和尾核[梗死體積占全腦(20.7± 4.5)%],本發明中劑量治療組梗死範圍僅出現在缺血側部分皮質[梗死體積占全腦(12.5± 3.6)%]。結果表明,本發明注射液可明顯減少腦梗死體積。

2.觀察對大鼠腦缺血再灌注後24小時腦皮質與海馬神經元數量的影響
取各組動物組織,石蠟固定並切片,採用經典的尼氏染色(詳見:Li Z, Liu W,Kang Z, et al. Mechanism of hyperbaric oxygen preconditioning in neonatal hypoxia-ischemia rat model[J]. Brain Res,2008,1196(2):151-156),結果見圖2。由圖2可見:與正常對照組相比,陰性對照組中大腦皮質與海馬的神經元明顯減少,說明腦 缺血再灌注後腦皮質與海馬神經元出現明顯損傷,本發明注射液低、中、高劑量組對腦缺血再灌注後腦皮質與海馬神經元均有改善,其中以中劑量 0.6ml/100 g組作用最明顯,神經元細胞數量和組織結構均接近正常對照組。結果表明,本發明注射液可減輕大鼠腦缺血再灌注後神經元損傷。

3.觀察對大鼠腦缺血再灌注後24小時腦皮質與海馬細胞凋亡數量的影響
取各組動物腦組織,石蠟固定並切片,採用Tunel染色,結果見圖3,圖3中分組同圖2。由圖3可見:本發明注射液低、中、高劑量組對腦缺血再灌注後腦皮 質與海馬細胞凋亡數量減少,其中以中劑量組作用最明顯,接近於正常對照組水平。結果表明,本發明注射液可減輕大鼠腦缺血再灌注後細胞凋亡。

4.觀察對大鼠腦缺血再灌注後24小時腦皮質與海馬凋亡酶活性的影響
取各組動物新鮮腦組織,採用螢光酶活性檢測,結果見圖4。由圖4可見:本發明注射液低、中、高劑量對腦缺血再灌注後大腦皮質與海馬中的凋亡酶的活性明顯減 小,其中以中劑量組0.6ml/100g作用最明顯,接近於正常對照組水平。結果表明,本發明注射液可降低大鼠腦缺血再灌注後凋亡酶的活性。

上述實驗結果表明,本發明注射液可減少大鼠局灶性腦缺血後腦梗死的體積、減少神經細胞損傷、減少細胞凋亡數量、降低皮質和海馬中的凋亡酶活性,在心肌缺血 再灌注,腎臟缺血再灌注和肝臟缺血再灌注損傷模型中觀察到類似效果。所以本發明可用做治療腦、心、腎等重要器官缺血再灌注損傷的藥物。

http://www.ckwang.com.tw/n-H2-703.html


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